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PCR反應問題解答(四)擴增產物出現多條帶 (雜帶)

放大字體  縮小字體 發布日期:2024-07-29  來源:上海撫生實業有限公司
核心提示:4. 擴增產物出現多條帶 (雜帶)(1)引物用量偏大,引物的特異性不高。應調換引物或降低引物的使用量。(2)循環的次數過多。適

4. 擴增產物出現多條帶 (雜帶)

(1)引物用量偏大,引物的特異性不高。應調換引物或降低引物的使用量。

(2)循環的次數過多。適當增加模板的量,減少循環次數。

(3)酶的用量偏高或酶的質量不好,應降低酶量或調換另一來源的酶。

(4)退火溫度偏低,退火及延伸時間偏長。應提高退火溫度,減少變性與延伸時間,也可采用二種溫度的PCR擴增。以2度為梯度設計梯度PCR反應優化退火溫度。

(5)樣品處理不當。

(6)Mg2+濃度偏高,因適當調整Mg2+使用濃度。

(7)若為PCR試劑盒,也可能時試劑盒本身質量有問題。

(8)復制提前終止。使用非熱啟動的聚合酶時常有發生。冰上準備反應體系或采用熱啟動聚合酶。

(9)反應緩沖液未全融化或未充分混勻。確保反應緩沖液融化全并徹底混勻。

(10)引物特異性差。利用BLAST檢查引物特異性或重新設計引物。

(11)引物量過多。減少反應體系中引物的用量。

(12)模板量過多。質粒DNA的用量應<50ng,而基因組DNA則應<200ng。

(13)外源DNA污染。確保操作的潔凈。

編輯:songjiajie2010

 
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