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蛋白濃度測(cè)定的方法有很多，但每種方法都有其特點(diǎn)和局限性，因而需要在了解各種方法的基礎(chǔ)上根據(jù)不同情況選用恰當(dāng)?shù)姆椒ǎ詽M足不同的要求。例如凱氏定氮法結(jié)果精確，但操作復(fù)雜，用于大批量樣品的測(cè)試則不太合適；Lowry法精確度較高，但是比較費(fèi)時(shí)，且每步的時(shí)間要求相對(duì)嚴(yán)格；Bradford法靈敏簡(jiǎn)便，但易受去垢劑的影響；BCA法以其試劑穩(wěn)定，抗干擾能力強(qiáng)，結(jié)果穩(wěn)定，靈敏度高而受歡迎。
1. Bradford法：
原理：在酸性環(huán)境中，蛋白質(zhì)結(jié)合考馬斯亮藍(lán)G250染料，導(dǎo)致染料的吸收峰發(fā)生位移，從紅棕色形式（吸收峰 465nm）轉(zhuǎn)化為藍(lán)色形式（吸收峰 610nm）。這兩種形式在 595nm 處光吸收差異most大，因此 595nm 是測(cè)定考馬斯染料-蛋白復(fù)合物的藍(lán)色的best波長(zhǎng)。結(jié)合到每個(gè)蛋白質(zhì)分子上的考馬斯染料分子數(shù)大致與蛋白所帶正電荷的數(shù)量成正比，因此通過比色法可以測(cè)定溶液中蛋白質(zhì)的含量。
優(yōu)點(diǎn)：
1. 靈敏度高，可以檢測(cè)到1μg/ml的蛋白質(zhì)濃度。
2. 反應(yīng)時(shí)間短，反應(yīng)時(shí)間只需5-10分鐘。
3. 操作簡(jiǎn)單，只需加入試劑，混合均勻即可。
4. 適用范圍廣，適用于大部分類型的蛋白質(zhì)。
5. 不受溶液中還原劑的影響。
缺點(diǎn)：
1. 受干擾：某些離子和化合物會(huì)干擾測(cè)定結(jié)果，去垢劑（表面活性劑）會(huì)產(chǎn)生強(qiáng)烈干擾，使得與許多常用的緩沖液不兼容。
2. 靈敏度不穩(wěn)定：不同蛋白質(zhì)的靈敏度不同，有些蛋白質(zhì)可能無法被檢測(cè)到。肽或蛋白質(zhì)的分子量必須大于 3,000 道爾頓才能被檢出。
3. 需要標(biāo)準(zhǔn)曲線：需要制備標(biāo)準(zhǔn)曲線來計(jì)算蛋白質(zhì)濃度，增加了操作步驟。
近來市場(chǎng)上已出現(xiàn)能兼容去垢劑的Bradford法蛋白定量試劑盒，可以兼容各種常用的蛋白緩沖液，大大拓展了應(yīng)用范圍。
