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常見測蛋白濃度方法的優(yōu)缺點(diǎn)比較(二)

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2024-11-04  來源:上海炎熙生物科技有限公司
核心提示:蛋白濃度測定的方法有很多,但每種方法都有其特點(diǎn)和局限性,因而需要在了解各種方法的基礎(chǔ)上根據(jù)不同情況選用恰當(dāng)?shù)姆椒,以滿足

蛋白濃度測定的方法有很多,但每種方法都有其特點(diǎn)和局限性,因而需要在了解各種方法的基礎(chǔ)上根據(jù)不同情況選用恰當(dāng)?shù)姆椒,以滿足不同的要求。例如凱氏定氮法結(jié)果精確,但操作復(fù)雜,用于大批量樣品的測試則不太合適;Lowry法精確度較高,但是比較費(fèi)時(shí),且每步的時(shí)間要求相對嚴(yán)格;Bradford法靈敏簡便,但易受去垢劑的影響;BCA法以其試劑穩(wěn)定,抗干擾能力強(qiáng),結(jié)果穩(wěn)定,靈敏度高而受歡迎。

2. BCA法:

原理:在堿性環(huán)境下,蛋白質(zhì)將銅離子還原成亞銅離子,二喹啉甲酸(BCA)與亞銅離子形成紫色的絡(luò)合物,這種絡(luò)合物溶于水并在562nm處產(chǎn)生光吸收峰值,光吸收強(qiáng)度在一定范圍內(nèi)與蛋白質(zhì)含量呈近似線性關(guān)系,因此使用比色法可以對蛋白質(zhì)進(jìn)行檢測和定量。BCA法沒有反應(yīng)終點(diǎn),反應(yīng)會隨著時(shí)間而持續(xù)進(jìn)行;通過一段時(shí)間的孵育后,反應(yīng)速度會變慢,從而可以對大量樣品進(jìn)行檢測。

優(yōu)點(diǎn):

1. 靈敏度高,可以檢測到低至0.5μg/mL的蛋白質(zhì)。

2. 對蛋白質(zhì)分子量沒有要求,小分子量肽也可檢測。

3. 結(jié)果穩(wěn)定可靠,重復(fù)性好。

4. 可用于高通量的蛋白質(zhì)測定。

5. 與Bradford法相比,可耐受一定濃度的去垢劑。

缺點(diǎn):

1. 受螯合劑和略高濃度的還原劑的影響:EDTA小于10mM,DTT和巰基乙醇均低于1mM。

2. 對不同蛋白質(zhì)的反應(yīng)性不同,因此不同蛋白質(zhì)靈敏度有差異。

3. 與Bradford法相比,操作相對較復(fù)雜,需要多個(gè)步驟。

編輯:songjiajie2010

 
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