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常見測蛋白濃度方法的優缺點比較(三)

放大字體  縮小字體 發布日期:2024-11-04  來源:上海炎熙生物科技有限公司
核心提示:蛋白濃度測定的方法有很多,但每種方法都有其特點和局限性,因而需要在了解各種方法的基礎上根據不同情況選用恰當的方法,以滿足

蛋白濃度測定的方法有很多,但每種方法都有其特點和局限性,因而需要在了解各種方法的基礎上根據不同情況選用恰當的方法,以滿足不同的要求。例如凱氏定氮法結果精確,但操作復雜,用于大批量樣品的測試則不太合適;Lowry法精確度較高,但是比較費時,且每步的時間要求相對嚴格;Bradford法靈敏簡便,但易受去垢劑的影響;BCA法以其試劑穩定,抗干擾能力強,結果穩定,靈敏度高而受歡迎。

3. Lowry法:

原理:在堿性條件下,蛋白質中的肽鍵與銅結合生成復合物。folin—酚試劑中的磷鉬酸鹽—磷鎢酸鹽被蛋白質中的酪氨酸和苯丙氨酸殘基還原,產生深蘭色(鉬蘭和鎢蘭的混合物)。在一定的條件下,蘭色深度與蛋白的量成正比。通過比色法測定溶液中蛋白質的含量。

適合于測定20mg/L-400mg/L含量的蛋白質溶液,可檢測的蛋白質量低達5mg,通常測定范圍是20~250mg。

優點:靈敏度高,可檢測低至1μg/mL的蛋白質;對于大部分蛋白質都有較好的線性關系。

缺點:

1.操作相對較復雜,需要多個步驟;

2.干擾物比較多,不僅還原劑和去垢劑會產生干擾,酚類、檸檬酸、硫酸銨、tris緩沖液、甘氨酸、糖類、甘油等均有干擾作用。

編輯:songjiajie2010

 
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