1. 實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前,無(wú)菌室及無(wú)菌操作臺(tái)以紫外燈照射 30-60 分鐘滅菌,以 75% 乙醇擦拭無(wú)菌操作臺(tái)面,并開啟無(wú)菌操作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn) 10 分鐘后,再開始實(shí)驗(yàn)操作。每次操作只處理一株細(xì)胞株,且即使培養(yǎng)基相同也不共享培養(yǎng)基,以避免失誤混淆或細(xì)胞間污染。實(shí)驗(yàn)完畢后,將實(shí)驗(yàn)物品帶出工作臺(tái),以 75% 乙醇擦拭無(wú)菌操作臺(tái)面。操作間隔應(yīng)讓無(wú)菌操作臺(tái)運(yùn)轉(zhuǎn) 10 分鐘以上后,再進(jìn)行下一個(gè)細(xì)胞株之操作。
2. 無(wú)菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞。必要物品,例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時(shí)放置,其它實(shí)驗(yàn)用品用完即應(yīng)移出,以利于氣流流通。實(shí)驗(yàn)用品用75% 乙醇擦拭后才帶入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在臺(tái)面之內(nèi)無(wú)菌區(qū)域,勿在邊緣非無(wú)菌區(qū)域操作。
3. 小心取用無(wú)菌實(shí)驗(yàn)物品,避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口,亦不要在打開容器正上方操作實(shí)驗(yàn)。容器打開后,以手夾住瓶蓋并握住瓶身,傾斜約 45°取用,盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。
4. 工作人員應(yīng)注意自身安全,須穿戴實(shí)驗(yàn)衣及手套后才進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對(duì)于來(lái)自人類或是病毒感染細(xì)胞株應(yīng)特別小心操作,并選擇適當(dāng)?shù)燃?jí)的無(wú)菌操作臺(tái)(至少Class II)。操作過(guò)程中,小心毒性藥品,例如 DMSO 及 TPA 等,并避免尖銳針頭傷害等。
5. 定期檢測(cè)下列項(xiàng)目:
5.1. CO2 鋼瓶中 CO2 壓力。
5.2. CO2 培養(yǎng)箱:CO2 濃度、溫度、及水盤是否有污染(水盤的水用無(wú)菌水,每周更換)。
5.3. 定期更換紫外線燈管及HEPA 過(guò)濾膜,預(yù)濾網(wǎng)(300小時(shí)/預(yù)濾網(wǎng),3000 小時(shí)/HEPA)。
6. 水槽可添加消毒劑(新潔爾滅 1:750),定期更換水槽的水。