血清,指血液凝固后,在血漿中除去纖維蛋白分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白已被除去的血漿。其主要作用是提供基本營養(yǎng)物質、提供激素和各種生長因子、提供結合蛋白、提供促接觸和伸展因子使細胞貼壁免受機械損傷、對培養(yǎng)中的細胞起到某些保護作用。血清在細胞培養(yǎng)中提供細胞生長所需的生長因子、激素、各種蛋白、促進貼壁和鋪展的因子、細胞傳代時蛋白酶抑制劑和其他多種不明營養(yǎng)物質,以胎牛血清(FBS)的使用最為普遍,其他血清類型還包括小牛血清、成牛血清、馬血清、羊血清、雞血清、兔血清等,其營養(yǎng)類型有很大差異,適用于不同類型細胞。
血清是細胞培養(yǎng)中用量最大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細胞生長必須的營養(yǎng)成份,具有極為重要的功能:
1、提供對維持細胞指數生長的激素,基礎培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物,以及主要的低分子營養(yǎng)物。
2、提供結合蛋白,能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等,能結合或調變它們所結合的物質活力。
3、有些情況下結合蛋白質能與有毒金屬和熱原質結合,起到解毒作用。
4、是細胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質上所需因子來源。
5、起酸堿度緩沖液作用。
6、提供蛋白酶抑制劑,使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活,保護細胞不受傷害。
血清最大的劣勢就是不穩(wěn)定,不穩(wěn)定原因如下:
1、來源不穩(wěn)定
以胎牛血清為例,懷孕母牛在屠宰前腹部被剖開,取出胎牛,在低溫無菌條件下,刺破胎牛的心臟以獲取血清。就這一條,動物倫理組織就可以把你攔住嘮嘮。另外,牛血清必須來自有文件證明無牛海綿狀腦病的牛群或國家,我國在對牛血清的質量《中國生物制品主要原輔料質控標準 2000》中提出比較嚴格的標準要求,包括蛋白質含量,細菌、真菌、支原體、牛病毒、大腸桿菌噬菌體、細菌內毒素,細胞增殖支持等檢查。
2、組分不穩(wěn)定
還有最讓人鬧心的,動物血清成分復雜,其組分及含量常和動物性別(公胎牛,母胎牛,如激素)、年齡、生理狀態(tài)、營養(yǎng)條件不同而有差異,是不是覺得特像中藥。還有,盡管血清大部分成分是已知的,但仍然存在不清楚的組分,所以導致標準化極其困難。所以,師兄師姐經常會告訴你說,不同生產廠家的血清差異很大,就是同一廠家生產的不同批次血清差異也很大。
3、用法不穩(wěn)定
實驗習慣的不同,都可能導致細胞實驗結果的不穩(wěn)定,比如,有人四度過夜融化,有人急性子,直接扔進水浴鍋。新手拿到一瓶血清,第一個問題就是問自己,要不要滅活?還有,別忘了,血清同時含有內毒素、血色素、補體、抗體等其他有害成分,影響細胞生長甚至導致細胞死亡,對某些實驗來說,極為重要。
如此的不穩(wěn)定,該怎么在實驗過程中盡可能的解決呢?
1、土豪和有得選擇的實驗室,請選擇無血清培養(yǎng)基。
2、不要頻繁更換血清牌子,不同廠家血清來源,生產工藝,包裝運輸等都有很大差異,盡量不要更換牌子。
3、選定品牌后,對于經過測試過的好用的血清,同一個批次多囤積一些,計算本次實驗的大概用量,然后在多加20%的儲備,放在-20或-80度保存。
4、細胞實驗建議每個人用自己的培養(yǎng)基,PBS,胰酶等試劑以及用具,保持實驗條件一致性,避免交叉污染,別給自己添堵,也別給別人添堵。
5、如果實在要更換血清,先將細胞在新的血清里傳兩到三代,適應新的條件后,細胞狀態(tài)穩(wěn)定,再進行后續(xù)的實驗。