培養的細胞可能會污染支原體,支原體是一種常見的細菌,它可以在實驗室環境中生長和繁殖。如果實驗操作不當,可能會導致支原體污染細胞培養物。此外,一些細胞系可能已經被感染了支原體,一些培養用的試劑也可能帶有支原體。由于支原體體積很小,可以穿過0.22um的無菌過濾膜,且通過常規顯微鏡觀察很難發現,因此常在不知不覺中傳播。為了避免支原體污染,實驗室應該采取嚴格的操作規范和消毒措施,并且對所用的細胞和各種試劑進行檢測,以確保細胞培養物的純度和質量。以下是一些檢測細胞污染支原體的方法:
一、體外培養法:培養法檢測支原體污染是經典的檢測方法,通過將待檢測樣品先接種到支原體液體培養基中大量繁殖,然后再轉接種到支原體固體培養基中,培養一段時間后(幾天至近一個月),如果固體培養中出現典型的支原體菌落,則說明待測樣品有支原體污染。其優缺點如下:
A.優點:
a. 可以直接檢測細胞內的支原體,具有較高的特異性和靈敏度。
b. 可以對不同類型的支原體進行鑒定和分類。
c. 可以對支原體進行藥物敏感性測試。
B.缺點:
a. 體外培養需要一定的時間,通常需要3-7天才能得到結果,少數生長慢的種類可能需要長達28天時間,因此該方法不能滿足緊急情況下的快速檢測需求。
b. 體外培養需要較高的技術水平和操作技巧,對實驗人員的要求較高。
c. 培養法對支原體的檢測效率受到多種因素的影響,如細胞的狀態、培養條件等,容易出現假陰性或假陽性結果。
d. 培養法不能檢測支原體的DNA或RNA,不能用于分子生物學研究。