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3M 乳酸菌測試片操作以及判讀
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2*MRS的操作步驟
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 1、按說明書要求的2倍用量制備2×MRS肉湯。例如：如果說明書要求1L水中加入55gMRS,則2×MRS則為1L水中加入110gMRS. |
 2、用標準稀釋液制備1：10樣品稀釋液，該樣品稀釋液可用于檢測其他微生物。 |
 3、用1mL 3M電子加樣器將1：10樣品稀釋液做1：2稀釋。先取0.5mL肉2×MRS肉湯，然后再吸取0.5mL 1:10樣品稀釋液，混勻后即可獲得含單倍 MRS的1：20樣品稀釋液。 |
 4、接種：在PAC檢測片上接種1mL 1：20樣品稀釋液（0.5mL 1：10標準稀釋液+0.5mL 2×MRS肉湯＝1:20含單倍MRS的樣品稀釋液）。 |
 5、培養：厭氧培養測試片。將檢測片透明膜一面朝上放入厭氧罐中，疊放數量不得超過20片。如果檢測片超過20片，可在同一罐中用一個堅硬的分隔器將檢測片分開培養。將厭氧罐放入30℃～35℃（86℃～95℉）培養箱中培養48＋3h. |
 6、判讀：PAC測試片可在標準菌落計數器或其他放大光源下計數。測試片賞的菌落數×稀釋倍數（20）即為每毫升樣品中酸乳菌數。詳見判讀手冊。 |
| 4*MRS肉湯的操作程序 | |
| 1、 按說明書要求的4倍用量制備4*MRS肉湯 2、 用標準稀釋液制備1：10樣品稀釋液（11g/99mL或25g/225mL）。取8mL供其它種類的微生物檢測用。 3、 將4*MRS肉湯加入1：10標準樣品稀釋液中，將獲得含0.5 MRS的樣品稀釋液。 * 如果稀釋液中含有11g樣品、99mL標準稀釋液，接種其它微生物測試片后，再加入18mL 4*MRS肉湯。 PAC測試片上生長的菌落數乘以11即為最終結果（個/g）。 * 如果稀釋液中含有25g樣品、255mL標準稀釋液，接種其它微生物檢測片后，再加入41mL 4*MRS肉湯。 PAC測試片上生長的菌落數乘以11即為最終結果（個/g）。 |
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 1、制備至少1：10或更高稀釋度的樣品稀釋液。稱量食品樣品于WirPak取樣袋、均質袋、稀釋瓶或其它適合的消容器中。 |
 2、加入適當的肉湯稀釋液，稀釋液的配置方法根據說明書制備。如果使用一種1：10稀釋液檢測多種微生物，3M公司提供了更為簡便的多種菌檢測程序（見前頁）。 |
 3、如果需要進行多倍稀釋，肉湯稀釋液只能用于最終稀釋步驟。初始稀釋可使用標準稀釋液，包括磷酸鹽緩沖液（ID）F磷酸鹽緩沖液，0.0425g/L KH2POI4 Ph7.2) 、0.1%蛋白膠水，蛋白膠鹽稀釋液（ISO方法6887）、蛋白膠水緩沖液（ISO方法6579）、生理鹽水（0.85～0.90％），不含亞硫酸氫鹽的 Letheen肉湯或蒸餾水，每步稀釋都應充分混勻。 |
 4、接種：按操作說明接種1.0mL樣品稀釋液于Petrifilm |
 5、培養：厭氧培養測試片。將測試片透明面朝上放入GASPak厭氧罐中，疊放數量不得超過20片。如果檢測片超過20片，可在同一罐中用一個堅硬的分隔器將檢測片分開培養。將厭氧罐放入30℃～35℃（86℉～95℉）培養箱中培養48＋3h. |
 6、判讀：Petrifilm: PAC測試片可在標準菌落計數器或其他放大光源下計數。測試片賞的菌落數乘以稀釋倍數，可獲得每毫升樣品中酸乳菌落數。詳見判讀手冊。 |
| 判讀手冊 | |
 Count=238使用PAC測試片,用MRS肉湯稀釋樣品和厭養,可促進同型發酵的乳酸菌生長. 圖1為同型發酵的乳酸菌落(不帶氣泡)的例子. |
 Count=30測試片中有導型發家哦的乳酸菌(產氣)和同型發酵的乳酸菌.用MRS肉湯稀釋, 使異型發酵的乳酸菌在暗影背景下有明顯氣泡產生(見黑圈1) 生長區邊緣的異型發酵乳酸菌菌落大約在1/4英寸時,可能不產生可視的氣泡(見黑圈2). |
 Count=0圖3是用MRS內湯為稀釋液接種PAC測試片作為對照,以MRS為稀釋液及厭氧培養將在測試片上產生一個稍顯暗色的淺色圓形生長區域. |
 Count=60測試片最適宜計數范圍是25-250個菌落,計數所有菌落,不管其大小和顏色深淺. |
 Estimated count=440 測試片面積約為20cm2 .當菌落數超過250個(如圖5所示)時,可估算菌落數.選擇其中一個或數個有代表性菌落的小方格(1cm2 ),計算平均菌落數,在乘以20可得到測試片上的菌落總數. |
 Count=TNTC(Estimated count=106)當菌落數多不可計(tntc)時,整個生長區可能變為粉紅色,如圖6所示.將測試片與以MRS肉湯作對照的測試片做比較,因為測試片的顏色變化是微小的(見圖3),此種情況下樣品需作進一步稀釋. |
 Count=TNTC(Estimated count=106)仔細觀察,在測試片生長區中心和邊緣處可見針尖大小的菌落,計錄為TNTC結果. |
 Conut=TNTC(Estimated count=108)當菌落數很多時,許多針尖大小的菌落會環繞在生長區邊緣,記錄為TNTC. |
 Count=TNTC圖9是TNTC的又一個例子.同型發酵乳酸菌菌落(無氣泡產生)(黑圈1)與異型發酵乳酸菌菌落(有氣泡產生)(黑圈2)同時出現. |
 Count=52人為的氣泡可能是不適當的接種所致,他們形狀不規則,且不與菌落相連接 |
